La hemoglobina libre en plasma (HLP) es un importante biomarcador en diversas afecciones médicas, como enfermedades cardiovasculares, renales y hematológicas. A pesar de su importancia clínica, la cuantificación precisa de la HLP ha sido difícil debido a la falta de técnicas sensibles y específicas. Este estudio presenta una nueva técnica para la cuantificación de la HLP basada en el uso de la espectrofotometría de microvolumen, que ha demostrado un excelente rendimiento analítico, permitiendo una medición confiable en muestras de plasma incluso en presencia de interferentes. El estudio de regresión lineal simple a 415 nm mostró una pendiente de 0,0840 mg/dL, una ordenada en el origen de 0,4288 y un coeficiente de determinación de 0,9616. La inexactitud para 5 mg/dL fue de 4,84 mg/dL y para 20 mg/dL, de 19,14 mg/dL. El error analítico total para 5 mg/dL fue de 14,60% y para 20 mg/dL de 12,27%. La recuperación analítica para 5 mg/dL fue de 99,96% y para 20 mg/dL de 98,1267%. Los límites de detección y cuantificación fueron de 1,61 mg/dL y 3,22 mg/dL, respectivamente. Los valores de referencia para los pacientes estudiados oscilaron entre 7,84 y 9,73 mg/dL. Su validación en una amplia gama de condiciones fisiológicas y patológicas permite reconocerla como una técnica robusta y versátil. Este nuevo método es preciso, sensible y específico, con rendimiento comparable o superior a métodos tradicionales. Puede aplicarse con una sola gota de plasma, ideal para pacientes pediátricos. Detecta eficazmente interferencias por lípidos y bilirrubina. Aunque limitado en capacidad de procesamiento y con costo elevado, se considera robusto y útil clínicamente para diagnóstico y seguimiento de patologías asociadas a hemólisis. Representa un avance significativo en la cuantificación de HLP en entornos clínicos y de investigación.